返回突出显示的引文生物染料和抗体有助于展示一种用于扩展显微镜的新型锚定策略相关页面免疫荧光显微镜CF® 染料用于多色超分辨率显微镜CF® 染料为超分辨率应用提供最佳性能超分辨率显微镜细胞表面和膜染料 CF® 染料标记二抗反应性 CF® 染料分享文章与同事分享这篇文章。复制链接发送电子邮件普通光学显微镜具有固有的分辨率限制，无法区分某些细胞内结构。电子显微镜等方法可用于需要更高分辨率但可能非常昂贵且需要繁琐的样品制备的应用。 2015 年，麻省理工学院的 Chen、Tillberg 和 Boyden 描述了一种方法，现在称为扩展显微镜 (ExM)，通过膨胀样品而不是使用更高分辨率的成像仪器来提高分辨率。当前的 ExM 方法 i涉及长的、多步骤的协议。细胞用分子\"手柄”标记，例如抗体偶联物或易于在水中快速水解的反应性化学物质，然后用​​与手柄共价连接的聚合物凝胶灌注。然后细胞材料被消化，凝胶膨胀，导致附着的标签同位素膨胀，从而使以前的纳米级结构可以使用光学显微镜来分辨。一个理想的 ExM 协议应该是简单的，提供 ≥ 10 倍的扩展，扩展后允许多样化的标记，并且与广泛的组织类型兼容。在他们 2023 年的自然生物技术文章中，Klimas 等人。描述一种名为 Magnify 的新型 ExM 策略，它满足上段中列出的理想 ExM 的标准。导致这些改进的 Magnify 的关键创新是结合锚定和胶凝步骤、新型凝胶配方以及使用富含热变性剂的溶液进行均质化。甲基丙烯醛，经典的小分子 fixative，被选为在胶凝过程中直接锚定生物分子，因为它在胶凝溶液中稳定，并且类似于甲醛固定，同时还提供异丙烯基官能团，有助于原位凝胶聚合。作者还开发了一种机械耐用的新型水凝胶配方。然后，他们使用一组一抗和 Biotium CF® 染料偶联的二抗，以及扩增前和扩增后染色来演示 Magnify 技术。为了测试均质化和扩增过程中的蛋白质保留，使用 CF® 染料琥珀酰亚胺酯对总样品蛋白质进行非特异性染色。然后，为了划定细胞边界，使用 CF® Dye 偶联 WGA 对糖萼进行染色。作者使用小鼠纹状体的冷冻切片、几种人体组织的 FFPE 切片（图 1）、干细胞衍生的气道基底细胞和 HEK-293FT 细胞精美地展示了 Magnify。这种相对直接的方法提供ed ≥ 10-fold expansion in a wide range of tissues with various fixation methods,允许在传统光学显微镜上以≈25 nm的有效分辨率成像，或使用超分辨率光学波动成像以≈15 nm的有效分辨率成像。图 1. Magnify 在不同人类 FFPE 样本中的验证。组织以 ×40（每个面板的左上角）成像。图像以 ×60 拍摄并使用 SOFI 处理（左下）。白框表示较高放大倍率图像的视场 (FOV)。然后使用 Magnify 协议处理样本，并在扩展后对相同的 FOV 进行成像 ×10（右上）和 ×40（右下，投影超过 4-17z 切片）。每个组织扩展后的线性扩展因子 (EF) 为结肠 8.85× (j)、乳房 9× (k)、子宫 8× (l)、胎盘 8.75× (m)、胸腺 10.00× (n) 和甲状腺 10.59 × (o). 生物尺度的比例尺（黄色，扩张后图像）。 j-o，顶部，10μm；底部，1⟩μm；p-r，5⟩μm。图片来源：A. Klimas 等。 https://doi.org/10.1038/s41587-022-01546-1 根据知识共享许可转载。Klimas 等人的特色视频。放大处理的小鼠大脑中 SST 神经元的 20233D 渲染，用 DAPI（白色）、抗 GFP（蓝色）、突触蛋白（洋红色）和 PSD95（绿色）染色，在 1x PBS 中扩展并以 40 倍放大率拍摄。3D 渲染用 DAPI 染色的扩展人膀胱癌组织切片（白色）、针对着丝粒结合蛋白 B 盒基序 CEPN-B 的 DNA FISH 探针（青色）、针对端粒基序 TelC 和 WGA 的 DNA FISH 探针（黄色），放大倍数为 40 倍。学习更多关于 Biotium 的具有多色灵活性的高性能 CF® 染料、CF® 染料偶联二抗和免疫荧光显微镜试剂的更多信息。完整引用 Klimas, A., Gallagher, B. R., Wijesekara, P., et al. Magnify 是一种通用的分子锚定策略，适用于膨胀显微镜.Nat Biotechnol 1-12 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s41587-022-01546-1